注射器造型笔开箱
注射笔百科 2023年5月22日 119
生长激素水剂注射器有哪几种？
目前市场上有预灌封和卡式瓶注射器两种，预灌封注射器使用方便，卡式瓶注射器需要另外购买针头，需要购买的针头另外的费用，人生长激素注射液，也通常被称为生长激素水剂，分为卡式瓶包装和预灌封包装。
（1）预灌封包装：单支单剂量包装，铅渗不添加防腐剂，直接一步注射即可，无需配药和替换针头。
（2）卡式瓶包装：单支多剂量包装槐源脊，添加防腐剂（多为苯酚），多次反复注射，需要使用注射器抽取药液注射。1、注射用人生长激素：
主要组成成分为人生长激素及赋型剂。
2、人生长激素注射液：
（1）预灌封包装：
主要成分：人生长激素。
辅料：组氨酸、泊洛沙姆188、甘露醇、注射用水。
（2）卡式瓶包装：
主要成分：人生长激素。
辅料：组氨酸、泊洛沙姆188、甘露醇、裂老注射用水、甘油、苯酚。[1]
茅台酒瓶盖结实吗,快递不会洒吧？
茅台酒瓶盖儿是结实的，一般是不会杀到，但是特殊的情况下撒的像下面这位陈理事。
陈女士说，她春节准备回家过年，来不及去姐姐家，准备送两瓶茅台国宾酒给姐姐。这周一上午，她找来圆通快递国贸分站的送货员来公司取件。“当着快递员的面验了货，千叮咛万嘱咐，千万要小心包装。”按照程序，快递员将酒带回快递公司去包装。根据快递单显示，上面的运送物品中写着“酒”，承诺是隔天送到。陈女士说，他们公司和这家快递公司合作了很多次，所以这次也和往常一样，并未对货品进行保价。
第二天下午，陈女士接到了姐姐的电话，“她在电话那头说酒和巧克力收到了，还笑着问我说这酒是不是我尝过了？”陈女士顿时觉得不对劲。根据姐姐的描述，她收到的是一如敬举个纸箱子，上面用黄色胶带严严实实裹了好几圈，在快递员的要求下，姐姐先签了字，等快递员走后，才开箱验货。
“开始只是觉得酒瓶有点轻，再晃晃，感觉少了一小半。”稿首陈女士的姐姐随后仔细检查发现，原本粘在瓶盖上的防伪标掉到了一边，两瓶酒的瓶盖也被拧开过。
快递公司不承认工作失误
按照快递单号查询显示，快件是在16日18时26分在国贸由快递员揽收的，在第二天早上7时到达了车公庄并且下车扫描。奇怪的是，跟踪进度显示，在17日上午11时和下午2时30分，快件分别被两次派送，而且还出现了两个派件人。
据收件员说，是他亲手包装的酒，他先用泡沫包装纸将酒包起来，再用胶带缠了一圈就装箱了。而据陈女士的姐姐称，她看到酒是被胶带缠了三四圈。所以，陈女士怀疑，是有人中途将箱子打开，喝了酒后再包装好送达姐姐家。
陈女士说，她随后联系圆通快递国贸分部，分部经理告诉她，要不把运费退还她。“太生气了！8元的运费要你免吗？挺贵的酒怎么办？”但快递公司坚决表示，酒肯定是没动过的。
记者今天上午先后致电圆通快递国贸分部和车公庄分部，工作人员均表示快递肯定没问题。随后记者咨询圆通总部，总部称会在调查后给陈女士一个答复。
律师提醒
快递贵重物品
切记事先保价
律师告诉记者，快递物品在运送过程中，得经过好几道关口、好几拨装卸工人的手，往往很难查到究竟是哪个环节出了问题，消费者在索赔的时候有难度。即便是责任在快递公司，有时也很难获得相应的赔偿，因为按照快递公司的所谓规定，如果是没有保价的物品，若在运输过程中有遗失、破损等现象，由发件方按运费的5倍价格来赔偿，而消费者就是按照这个标渣碧准来索赔所花费的时间和精力都非常大，很不划算，很多时候消费者只能选择吃“哑巴亏”。律师提醒，运送贵重物品应选择大的快递公司，一定要事先保价。
查氏培养基的基本原理
实验一 常用培养基的制备、灭菌与消毒
一、实验目的
了解培养基的配制原理；掌握配制培养基的一般方法和步骤；了解常见灭菌、清毒基本原理及方法；掌握干热天菌、高压蒸汽灭菌及过滤除菌的操作方法。
二、实验原理
培养基是人工按一定比例配制的供微生物生长繁殖和合成代谢产物所需要的营养物质的混合物。培养基的原材料可分为碳源、氮源、无机盐、生长因素和水。根据微生物的种类和实验目的不同，培养基也有不同的种类和配制方法。
牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供微生物生长繁殖之用。
干热天菌、高压蒸汽灭菌方法主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。
三、试剂与器材
1.器材 试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、培养基、分装器、天平、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅、pH度纸、棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布、吸管、培养皿、电烘箱、注射器、微孔滤膜过滤器、镊子等。
2.试剂 牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂
四、实验内容
1.称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查
2.干热灭菌：装入待灭菌物品→升温→恒隐郑温→降温→开箱取物
3.高压蒸汽灭菌岁携掘：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查
4.过滤除菌：组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌
五、关键步骤及注意事项
1.要严格按配方配制。
2.调pH不要过头。
3.干热灭菌要注意物品不要堆放过紧，注意温度的时间控制，70ºC以下放物、取物。
4.高压灭菌要注意物品不要过多，加热后排除冷空气，到时降压回零取物。
5.过滤除菌要注意各部件灭菌，压滤时，压力要适当，不可太猛太快，滤膜要注意清洗保存。
六、思考题
1.培养基配好后，为什么必须立即灭菌?如何检查灭菌后的培养基是无菌的?
2.在配制培养基乎核的操作过程中应注意些什么问题?为什么?
3.培养微生物的培养基应具备哪些条件?为什么?
4.培养基的配制原则是什么?
实验二
土壤中微生物分离纯化培养
一、实验目的
掌握倒平板的方法和几种常用的分离纯化微生物的基本操作技术；了解不同的微生物菌落在斜面上、半固体培养基和液体培养基中的生长特征；进一步熟练和掌握微生物无菌操作技术；掌握微生物培养方法。
二、实验原理
从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。常用的分离、纯化方法：单细胞挑取法，稀释涂布平板法，稀释混合平板法，平板划线法 稀释涂布平板法步骤：倒平板－制备土壤污水稀释液－涂布－培养－挑菌落；平板划线法步骤：倒平板－标记培养基名称－划线。
三、试剂与器材
1.器材 盛9m1无菌水的试管、盛90m1无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶、无菌玻璃涂棒、无菌吸管、接种环、酒精灯、无菌培养皿、显微镜、血细胞计数板等。
2.试剂 牛肉膏蛋白胨培养基，高氏1号培养基，查氏培养基
四、实验内容
1.土壤稀释液的制备
2.微生物分离纯化：稀释涂平板法，平皿划线分离法，微生物培养技术
五、关键步骤及注意事项
1.掌握含菌培养基的配制，严格控制温度。
2.平板划线应防止染菌，同时应注意划线深度及密度。
六、思考题
1.如何确定平板上某单个菌落是否为纯培养?请写出实验的主要步骤。
2.如果要分离得到极端嗜盐细菌，在什么地方取样品为宜?并说明理由。
实验三
菌种保藏
一、实验目的
1.学习并掌握菌种保藏的基本原理。
2.掌握常用的几种不同的菌种保藏方法。
二、实验原理
微生物个体微小、代谢旺盛、生长繁殖快，如果保存不妥容易发生变异和杂菌污染，甚至导致细胞死亡等现象。因此，保存好菌种是非常必要和重要的。常用的菌种保藏方法包括传代培养法、载体法、悬液法、冷冻法和真空干燥法
三、试剂与器材
1.材料 大肠杆菌、青霉菌、放线菌
2.试剂 液体石蜡、甘油、五氧化二磷、95％乙醇、10％盐酸、无水氯化钙、食盐、干冰
3.器材 无菌吸管、无菌滴管、无菌培养皿；安额管、冻干管、40目与100目筛子、油纸、滤纸条(0.5X1.2cm)、干燥器、真泵器、真空泵、真空压力表、喷灯、L形五通管、冰箱、低温冰箱(—30℃)、超低温冰箱和液氮罐等。
四、实验内容
1.斜面保藏法
2.液体石蜡法
3.穿刺保藏法
4.砂土管保藏法
5.冷冻真空干燥保存法
五、关键步骤及注意事项
1.清楚各种保藏方法的优缺点，针对不同要求选择适宜的保藏方法。
2.熔封安瓶时防止封闭不严。
3.液氮冻存操作应防止冻伤。
六、思考题
根据你自己的实验。谈谈1–2种菌种保藏方法的利弊?
实验四
细菌形态观察及单染色
一、实验目的
1.了解简单染色法的原理，并掌握其操作方法。
2.学习并掌握微生物涂片、染色的基本技术和无菌操作技术。
3.巩固显微镜(油镜)的使用方法。
4.初步认识细菌的形态特征。
二、实验原理
细菌个体微小，且较透明，必须借助染色法使菌体着色，与背景形成鲜明的对比，以便在显微镜下进行观察。根据实验目的不同，可分为简单染色法、鉴别染色法和特殊染色法等。简单染色法是最基本的染色方法，是利用单一染料对细菌进行染色。此法操作简便，适用于菌体一般形状和细菌排列的观察。常用碱性染料进行简单染色。
三、试剂与器材
1.材料 大肠杆菌，枯草芽孢杆菌
2.试剂 吕氏碱性美蓝染液(或草酸铵结晶紫染液)、齐氏石炭酸复红染液。
3.器材 显微镜、酒精灯、载玻片、接种环、双层瓶(内装香柏油和二甲苯)等。
四、实验内容
简单染色法：涂片→干燥→固定→染色→水洗→干燥→镜检
五、关键步骤及注意事项
1.涂片时，生理盐水及取菌不宜过多，涂片应尽可能均匀，
2.水洗步骤水流不宜过大，过急，以免涂片薄膜脱落。
六、思考题
1.你认为制备细菌染色标本时，尤其应该注意哪些环币?
2.为什么要求制片完全干燥后才能用油镜观察?
3.如果你的涂片未经热固定，将会出现什么问题?如果加热温度过高、时间太长，又会怎样呢?
实验五
放线菌及霉菌形态观察
一、实验目的
1.了解放线菌、霉菌形态观察的原理。
2.学习并掌握观察放线菌、霉菌形态的操作方法。
3.初步了解放线菌、霉菌的形态特征。
二、实验原理
放线菌是指能形成分枝丝状体或菌丝体的一类革兰氏阳性细菌。常见放线菌大多能形成菌丝体，紧贴培养基表面或深入培养基内生长的叫基内菌丝(简称“基丝”)，基丝生长到一定阶段还能向空气中生长出气生菌丝(简称“气丝”)，并进一步分化产生孢子丝及孢子。有的放线菌只产生基丝而无气丝。在显微镜下直接观察时，气丝在上层、基丝在下层，气丝色暗，基丝较透明。孢子丝依种类的不同，有直、波曲、各种螺旋形或轮生。
霉菌可产生复合分枝的菌丝体，分基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子。霉菌菌丝体(尤其是繁殖菌丝)及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多，常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍，因此，用低倍显微镜即可观察。人们设计了各种培养和观察方法，这些方法的主要目的是为了尽可能保持放线菌自然生长状态下的形态特征。本实验采用插片法。
插片法：将放线菌接种在琼脂平板上，插上灭菌盖玻片后培养，使放线菌菌丝沿着培养基表面与盖玻片的交接处生长而附着在盖玻上。观察时，轻轻取出盖玻片，置于载玻片上直接镜检。这种方法可观察到放线菌自然生长状态下的特征，而且便于观察不同生长期的形态。
三、试剂与器材
1.材料 黑曲霉、青霉和根霉，细黄
查氏培养基的基本原理
实验一 常用培养基的制备、灭菌与消毒
一、实验目的
了解培养基的配制原理；掌握配制培养基的一般方法和步骤；了解常见灭菌、清毒基本原理及方法；掌握干热天菌、高压蒸汽灭菌及过滤除菌的操作方法。
二、实验原理
培养基是人工按一定比例配制的供微生物生长繁殖和合成代谢产物所需要的营养物质的混合物。培养基的原材料可分为碳源、氮源、无机盐、生长因素和水。根据微生物的种类和实验目的不同，培养基也有不同的种类和配制方法。
牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供微生物生长繁殖之用。
干热天菌、高压蒸汽灭菌方法主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。
三、试剂与器材
1.器材 试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、培养基、分装器、天平、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅、pH度纸、棉花、牛和粗物皮纸、记号笔、麻绳、纱布、吸管、培养皿、电烘箱、注射器、微孔滤膜过滤器、镊子等。
2.试剂 牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂
四、实验内容
1.称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查
2.干热灭菌：装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物
3.高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查
4.过滤除菌：组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌
五、关键步骤及注意事项
1.要严格按配方配制。
2.调pH不要过头。
3.干热灭菌要注意物品不要堆放过紧，注意温度的时间控制，70ºC以下放物、取物。
4.高压灭菌要注意物品不要过多，加热后排除冷空气，到时降压回零取物。
5.过滤除菌要注意各部件灭菌，压滤时，压力要适当，不可太猛太快，滤膜要注意清洗保存。
六、思考题
1.培养基配好后，为什么必须立即灭菌?如何检查灭菌后的培养基是无菌的?
2.在配制培养基的操作过程中应注意些什么问题?为什么?
3.培养微生物的培养基应具备哪些条件?为什么?
4.培养基的配制唤液原则是什么?
实验二 土壤中微生物分离纯化培养
一、实验目的
掌握倒平板的方法和几种常用的分离纯化微生物的基本操作技术；了解不同的微生物菌落在斜面上、半固体培养基和液体培养基中的生长特征；进一步熟练和掌握微生物无菌操作技术；掌握微生物培养方法。
二、实验原理
从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。常用的分离、纯化方法：单细胞挑取法，稀释涂布平板法，稀释混合平板法，平板划线法 稀释涂布平板法步骤：倒平板－制备土壤污水稀释液－涂布－培养－挑菌落；平板划线法步骤：倒平板－标记培养基名称－划线。
三、试剂与器材
1.器材 盛9m1无菌水的试管、盛90m1无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶、无菌玻璃涂棒、无菌吸管、接种环、酒凳激精灯、无菌培养皿、显微镜、血细胞计数板等。
2.试剂 牛肉膏蛋白胨培养基，高氏1号培养基，查氏培养基
四、实验内容
1.土壤稀释液的制备
2.微生物分离纯化：稀释涂平板法，平皿划线分离法，微生物培养技术
五、关键步骤及注意事项
1.掌握含菌培养基的配制，严格控制温度。
2.平板划线应防止染菌，同时应注意划线深度及密度。
六、思考题
1.如何确定平板上某单个菌落是否为纯培养?请写出实验的主要步骤。
2.如果要分离得到极端嗜盐细菌，在什么地方取样品为宜?并说明理由。
实验三 菌种保藏
一、实验目的
1.学习并掌握菌种保藏的基本原理。
2.掌握常用的几种不同的菌种保藏方法。
二、实验原理
微生物个体微小、代谢旺盛、生长繁殖快，如果保存不妥容易发生变异和杂菌污染，甚至导致细胞死亡等现象。因此，保存好菌种是非常必要和重要的。常用的菌种保藏方法包括传代培养法、载体法、悬液法、冷冻法和真空干燥法
三、试剂与器材
1.材料 大肠杆菌、青霉菌、放线菌
2.试剂 液体石蜡、甘油、五氧化二磷、95％乙醇、10％盐酸、无水氯化钙、食盐、干冰
3.器材 无菌吸管、无菌滴管、无菌培养皿；安额管、冻干管、40目与100目筛子、油纸、滤纸条(0.5X1.2cm)、干燥器、真泵器、真空泵、真空压力表、喷灯、L形五通管、冰箱、低温冰箱(—30℃)、超低温冰箱和液氮罐等。
四、实验内容
1.斜面保藏法
2.液体石蜡法
3.穿刺保藏法
4.砂土管保藏法
5.冷冻真空干燥保存法
五、关键步骤及注意事项
1.清楚各种保藏方法的优缺点，针对不同要求选择适宜的保藏方法。
2.熔封安瓶时防止封闭不严。
3.液氮冻存操作应防止冻伤。
六、思考题
根据你自己的实验。谈谈1–2种菌种保藏方法的利弊?
实验四 细菌形态观察及单染色
一、实验目的
1.了解简单染色法的原理，并掌握其操作方法。
2.学习并掌握微生物涂片、染色的基本技术和无菌操作技术。
3.巩固显微镜(油镜)的使用方法。
4.初步认识细菌的形态特征。
二、实验原理
细菌个体微小，且较透明，必须借助染色法使菌体着色，与背景形成鲜明的对比，以便在显微镜下进行观察。根据实验目的不同，可分为简单染色法、鉴别染色法和特殊染色法等。简单染色法是最基本的染色方法，是利用单一染料对细菌进行染色。此法操作简便，适用于菌体一般形状和细菌排列的观察。常用碱性染料进行简单染色。
三、试剂与器材
1.材料 大肠杆菌，枯草芽孢杆菌
2.试剂 吕氏碱性美蓝染液(或草酸铵结晶紫染液)、齐氏石炭酸复红染液。
3.器材 显微镜、酒精灯、载玻片、接种环、双层瓶(内装香柏油和二甲苯)等。
四、实验内容
简单染色法：涂片→干燥→固定→染色→水洗→干燥→镜检
五、关键步骤及注意事项
1.涂片时，生理盐水及取菌不宜过多，涂片应尽可能均匀，
2.水洗步骤水流不宜过大，过急，以免涂片薄膜脱落。
六、思考题
1.你认为制备细菌染色标本时，尤其应该注意哪些环币?
2.为什么要求制片完全干燥后才能用油镜观察?
3.如果你的涂片未经热固定，将会出现什么问题?如果加热温度过高、时间太长，又会怎样呢?
实验五 放线菌及霉菌形态观察
一、实验目的
1.了解放线菌、霉菌形态观察的原理。
2.学习并掌握观察放线菌、霉菌形态的操作方法。
3.初步了解放线菌、霉菌的形态特征。
二、实验原理
放线菌是指能形成分枝丝状体或菌丝体的一类革兰氏阳性细菌。常见放线菌大多能形成菌丝体，紧贴培养基表面或深入培养基内生长的叫基内菌丝(简称“基丝”)，基丝生长到一定阶段还能向空气中生长出气生菌丝(简称“气丝”)，并进一步分化产生孢子丝及孢子。有的放线菌只产生基丝而无气丝。在显微镜下直接观察时，气丝在上层、基丝在下层，气丝色暗，基丝较透明。孢子丝依种类的不同，有直、波曲、各种螺旋形或轮生。
霉菌可产生复合分枝的菌丝体，分基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子。霉菌菌丝体(尤其是繁殖菌丝)及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多，常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍，因此，用低倍显微镜即可观察。人们设计了各种培养和观察方法，这些方法的主要目的是为了尽可能保持放线菌自然生长状态下的形态特征。本实验采用插片法。
插片法：将放线菌接种在琼脂平板上，插上灭菌盖玻片后培养，使放线菌菌丝沿着培养基表面与盖玻片的交接处生长而附着在盖玻上。观察时，轻轻取出盖玻片，置于载玻片上直接镜检。这种方法可观察到放线菌自然生长状态下的特征，而且便于观察不同生长期的形态。
三、试剂与器材
1.材料 黑曲霉、青霉和根霉，细黄链霉菌或青色链霉菌，灭菌的高氏I号琼脂和灭菌的查氏培养基。
2.实验器材 经灭菌的：平皿、玻璃纸、无菌吸管、盖玻片、玻璃涂棒，以及载玻片、接种环、接种铲、镊子、显微镜等。
四、实验内容
倒平板→接种→插片→培养→镜检
五、关键步骤及注意事项
1.倒平板要厚一些，接种时划线要密。
2.插片时要有一定角度并与划线垂直。
3.观察时，宜用略暗光线；先用低倍镜找到适当视野，更换高倍镜观察。
4.如果用0.1%美蓝对培养后的盖玻片进行染色后观察，效果会更好。
六、思考题
1.镜检时，你如何区分放线菌的基内菌丝和气生菌丝?
2.你认为霉菌和放线菌菌丝的主要区别是什么？
实验六 革兰氏染色及芽孢染色
一、实验目的
1.了解革兰氏染色法和芽孢染色法的原理，并掌握其操作方法。
2.了解革兰氏染色法在细菌分类鉴定中的重要性。
3.学习并掌握微生物涂片、染色的基本技术和无菌操作技术。
4.学习显微镜(油镜)的使用方法。
5.初步认识细菌的形态特征。
二、实验原理
革兰氏染色法的基本步骤是：先用初染剂结晶紫进行染色，再用碘液媒染，然后用乙醇(或丙酮)脱色，最后用复染剂(如番红)复染。经此方法染色后，细胞保留初染剂蓝紫色的细菌为革兰氏阳性菌；如果细胞中初染剂被脱色剂洗脱而使细菌染上复染剂的颜色(红色)，该菌属于革兰氏阴性菌。革兰氏染色反应是细菌重要的鉴别特征，为保证染色结果的正确性，采用规范的染色方法是十分必要的。
芽孢染色法的基本原理，用着色力强的染色剂孔雀绿或石炭酸复红，在加热条件下染色，使染料不仅进入菌体也可进入芽孢内，进入菌体的染料经水洗后被脱色，而芽孢一经着色难以被水洗脱，当用对比度大的复染剂染色后，芽孢仍保留初染剂的颜色，而菌体和芽孢囊被染成复染剂的颜色，使芽孢和菌体更易于区分。
三、试剂与器材
1.材料：枯草芽孢杆菌12～18h营养琼脂斜面培养物，大肠杆菌约24h营养琼脂斜面培养物
2.试剂 革兰氏染色液(结晶紫液、碘液、95％乙醇、番红液)。5％孔雀绿水溶液
3.实验器材 小试管、滴管、烧杯、试管架、滤纸、木夹子、载玻片、盖玻片、凹载玻片、无菌水、显微镜等、接种环、双层瓶(内装香柏油和二甲苯)、擦镜纸、生理盐水等。
四、实验内容
1.革兰氏染色法 制片→初染→媒染→脱色→复染→镜检。
2.Schaefer-Fulton氏染色法 制片→染色→水洗→复染→水洗→镜检。
五、关键步骤及注意事项
1.涂片时，生理盐水及取菌不宜过多，涂片应尽可能均匀，
2.乙醇脱色是革兰氏染色操作的关键环节，严格掌握脱色时间。
六、思考题
1.你认为要得到正确的改良的革兰氏染色结果必须注意哪些操作?关键在哪一步?为什么?
2.现有一株细菌宽度明显大于大肠杆菌的粗壮杆菌，请你鉴定其革兰氏染色反应。你怎样运用大肠杆菌和金黄色葡萄球菌为对照菌株进行涂片染色，以证明你的染色结果正确性。
3.你的染色结果是否正确?如果不正确，请说明原因。
4.若涂片中观察到的只是大量游离芽孢，很少看到芽孢囊及营养细胞，你认为这是什么原因?
5.说明芽孢染色法的原理。用简单染色法能否观察到细菌的芽孢?
实验七 酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定
一、实验目的
1.观察酵母菌的形态特征、出芽生殖方式，并掌握酵母菌与细菌形态特征的区别。
2.学习鉴别死活细胞的实验方法。
二、实验原理
酵母菌是单细胞的真核微生物，菌体比细菌大而且不运动。酵母菌的繁殖方式分为无性繁殖和有性繁殖两种，以无性繁殖为主。芽殖是酵母菌普遍的无性繁殖方式，少数为裂殖；有性繁殖是产生子囊和子囊孢子。本实验是通过美蓝染液水浸片和水一碘液水浸片来观察酵母的形态和芽殖方式。
美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。用美蓝对酵母活细胞染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，而对代谢作用微弱或死细胞，无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。因此，不仅用此法可观察酵母细胞形态，也可用来鉴别酵母菌的死细胞和活细胞。
三、试剂与器材
1.材料 酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)或卡尔酵母(Saccharomyces calsbergensis)培养2天左右的麦芽汁(或豆芽汁)液体培养物。
2.试剂 0.05％和O.1％吕氏碱性美蓝染色液、革兰氏染色用的碘液。
3.器材 显微镜、载玻片、盖玻片、接种环、洒精灯等。
四、实验内容
1.美蓝浸片观察 酵母培养→制片→染色→镜检→30分钟后再镜检
2.水-碘浸片观察
五、关键步骤及注意事项
1.染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液溢出或出现大量气泡。
2.用镊子取一块盖玻片，先将一侧与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下，使其盖在菌液上，盖玻片不宜平着放下，避免气泡产生。
六、思考题
1.吕氏碱性美蓝染液浓度和作用时间的不同，对酵母菌死细胞数量有何影响?试分析其原因。
2.在显微镜下，酵母菌有哪些突出的特征区别于一般细菌?
实验八 微生物直接计数法及测微技术
一、实验目的
1.了解血球计数板计数原理，并掌握计数方法。
2.掌握用测微尺测定微生物大小的方法。
二、实验原理
显微镜直接计数法是将一定稀释的菌体或孢子悬液注入血球计数板的计数室中，于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。因为计数板是一块特别的载玻片。其上由四条槽构成三个平台；中间较宽的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分为九个大方格，一种是一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格(见图2—3—44)；另一种是一个大方格分成16个中方格，每个中方格又分成25个小方格，无论哪种每个大方格中的小方格都是400个。每一个大方格边长为0．1mm，所以计数室的容积为0．1mm3。计数时，通常只用5个中格内的菌体(孢子)数即可。然后求出每个中方格的平均值，再乘上25或16，得出一个大方格中的总茵数，再换算成lml菌液中的总菌数。若设5个中方格中总菌数为N，菌液稀释倍数为M，如果是25个中方格计数板，则计算方法为：
lml菌液中的总菌数=平均每个中格中菌的个数×25×104×M=50000N•M(个)
微生物细胞的大小是微生物基本的形态特征，也是分类鉴定的依据之一。微生物大小的测定，需要在显微镜下，借助于特殊的测量工具——测微尺，包括目镜测微尺和镜台测微尺。镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线的载玻片，一般是将1mm等分为100格，每格长0．01mm(即10pm)。镜台测微尺并不直接用来测量细胞的大小，而是用于校正目镜测微尺每格的相对长度。
三、试剂与器材
1.材料 酿酒酵母、藤黄微球菌和大肠杆菌的染色标本片、酿酒酵母24h马铃薯斜面培养物。
2.实验器材 细胞计数板、显微镜、盖玻片、无菌毛细滴管、目镜测微尺、镜台测微尺、载玻片、盖玻片、显微镜等。
四、实验内容
1.微生物直接计数法 菌悬液制备→镜检计数室→加样品→显微镜计数→清洗血细胞计数板
2.微生物测微技术 装目镜测微尺→校正→菌体大小测定
五、关键步骤及注意事项
1.防止加样空气泡产生。
2.调节显微镜光线的强弱适当。
六、思考题
1.根据你的体会，说明用血细胞计数板计数的误差主要来自哪些方面?应如何尽量减少误差、力求准确?
2.某单位要求知道一种干酵母粉中的活菌存活率，请设计1～2种可行的检测方法。
3.为什么更换不同放大倍数的目镜或物镜时，必须用镜台测微尺重新对目镜测微尺进行校正?
实验九 大肠杆菌生长曲线的测定
一、实验目的
1.了解大肠杆菌的生长曲线特征和繁殖规律，并学会绘制生长曲线。
2.复习光电比浊法测量细菌数量的方法。
二、实验原理
将一定量的细菌转入新鲜液体培养基中，在适宜的条件下培养细胞要经历延迟期、对数期、稳定期和衰亡期四个阶段。以培养时间为横坐标，以细菌数目的对数或生长速率为纵坐标作图所绘制的曲线称为该细菌的生长曲线。不同的细菌在相同的培养条件下其生长曲线不同，同样的细菌在不同的培养条件下所绘制的生长曲线也不相同。
三、试剂与器材
1.材料与试剂 大肠杆菌、LB液体培养基70ml、分装2支大试管(5ml／支)、剩余60ml装入250ml的三角瓶。
2.器材 722型分光光度计、恒温振荡摇床、无菌试管、无菌吸管等。
四、实验内容
编号→接种→培养→比浊测定
五、关键步骤及注意事项
1.测定OD值时，要求从低浓度到高浓度测定
2.严格控制培养时间
六、思考题
1.根据实验数据画出生长曲线，并说明大肠杆菌生长特征。
2.如果用活菌计数法制作生长曲线，你认为会有什么不同?两者各有什么缺点7．
3.次生礼谢产物的大量积累在哪个时期?根据细菌生长繁殖的规律，采用哪些措施可使次生代谢产物积累更多?
实验十 水中细菌总数的测定
一、实验目的
1.学习水样的采取方法和水样细菌总数测定的方法。
2.了解水源水的平板菌落计数的原理。
二、实验原理
本实验应用平板计数技术测定水中细菌总数。由于水中细菌种类繁多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下，使水中所有的细菌均能生长繁殖，因此，以一定的培养基平板上生长出来的菌落，计算出来的水中细菌总数仅是一种近似值。目前一般是采用普通牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。
三、试剂与器材
1.试剂 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，灭菌水
2.器材 灭菌三角瓶，灭菌的带玻璃塞瓶，灭菌培养皿，灭菌吸管，灭菌试管等。
四、实验内容
1.水样的采取
2.细菌总数测定
3.菌落计数方法
五、关键步骤及注意事项
1.注意全过程防止染菌
六、思考题
从自来水的细菌总数结果来看，是否合乎饮用水的标准？
实验十一 细菌细胞的生化反应实验
一、实验目的
了解并掌握细菌鉴定中常用生理生化反应的原理和方法。
二、实验原理
各种细菌由于具有不同的酶系统，致使它们能利用不同的底物，或虽然可以利用相同的底物，却产生不同的代谢产物，因此可以利用各种生理生化反应来鉴别细菌。
糖发酵是最常用的生化反应，存在于大多数细菌中。不同的细菌在糖的分解能力上存在很大的差异。有些细菌能分解某种糖并产生酸性物质(如乳酸、丙酸、醋酸等)和气体(如二氧化碳、氢、甲烷等)，而有些细菌只产生酸不产生气体。例如大肠杆菌分解乳糖和葡萄糖产酸并产气，普通变形杆菌分解葡萄糖产酸产气，但不能分解乳糖。酸的产生可利用指示剂来判断。在培养基中加入溴甲酚紫(pH5．2为黄色，pH6．8为紫色)，当发酵产酸时，使培养基由紫色变为黄色。气体的产生可由发酵试管中倒置的德汉氏小管中有无气泡的出现来验证．
三、试剂与器材
1.材料大肠杆菌、普通变性杆菌、产气杆菌、糖发酵培养基、蛋白胨水培养基、葡萄糖蛋白胨水培养基。
2.试剂甲基红试剂、40％KOH、5％a一萘酚、乙醚、吲哚试剂。
3.实验器材德汉氏小管、试管、接种环、恒温培养箱。
四、实验内容
培养基配制→编号→试管→接种→培养→观察结果
五、关键步骤及注意事项
1.要严格按照培养基配方配制培养基。
2.观察结果时要注意滴加药量及反应时间。
六、思考题
1.哪些生理生化试验可用于区别大肠杆菌和产生肠杆菌?结果如何?
2.做糖发酵试验时应注意哪些问题?
3.甲基红试验和伏一普试验的最终产物如何?为什么会出现不同的最终产物?
实验十二 噬菌体的分离、纯化及效价测定
一、实验目的
1.学习分离、纯化噬菌体的原理和方法
2.观察噬菌斑的形态和大小
3.掌握噬菌体效价测定的基本方法
二、实验原理
噬菌体是细菌的专性寄生物，自然界中凡是有细菌存在的地方，均可以发现其特异性的噬菌体，噬菌体侵入细菌细胞后，利用宿主细胞的酶系统进行复制和增殖，最终导致细菌细胞裂解，噬菌体从细胞中释放出来，可以进一步侵染细菌细胞。在液体培养基中，噬菌体可以使浑浊的菌悬液变为澄清。在长有宿主细菌的固体培养基平板上，噬菌体可以裂解细菌形成透明的空斑，即噬菌斑，一个噬菌体产生一个噬菌斑，因此可以利用这个性质对噬菌体进行分离和效价的测定。
噬菌体的效价是指噬菌体的浓度，即一毫升培养液中所含有的噬菌体数量。噬菌体效价的测定方法多采用双层琼脂平板法。先在培养皿中倒入底层固体培养基，凝固后再倒入含有宿主细菌和一定稀释度噬菌体的半固体培养基。培养一段时间后，计算噬菌斑的数量。
三、试剂与器材
1.材料大肠杆菌、牛肉膏蛋白胨固体培养基、牛肉膏蛋白胨半固体培养基(含有琼脂0．5％，试管分装，每管3～5m1)、三倍浓缩的牛肉膏蛋白胨液体培养基。
2.器材培养皿、无菌吸管、三角瓶、抽滤瓶、蔡氏细菌滤器、真空泵、阴沟污水。
四、实验内容
噬菌体分离→噬菌体纯化→效价测定
五、关键步骤及注意事项
1.噬菌体时要注意细菌滤器的型号。
2.纯化噬菌体时要注意形态、大小。
3.效价测定时要注意双层琼脂平板法的使用技巧。
六、思考题
1.在固体培养基平板上为什么能形成噬茵斑?
2.从固体培养基平板上得到的噬菌斑数目，如何计算噬菌体的效价？
植物体细胞培养基操作
楼主好！！ 实验八 培养基的制备与灭菌 一、目的要求1. 掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。2. 掌握培养基的配置方法。3. 掌握干热灭菌和高压蒸汽灭菌的操作方法。二、基本原理 正确掌握培养基的配制方法是从事微生物学实验工作的重要基础。由数樱于微生物种类及代谢类型的多样性．因而用于培养微生物的培养基的种类也很多，它们的配方及配制方法虽各有差异。但一般培养基的配制程序却大致相同．例如器皿的准备，培养基的配制与分装，棉塞的制作，培养基的灭菌，斜面与平板的制作以及培养基的无菌检查等基本环节大致相同。三、实验材料1. 药品：待配各种培养基的组成成分、琼脂、1mol/L的NaOH和HCl溶液。2. 仪器及玻璃器皿：天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、三角瓶、培养皿、玻璃漏斗等。3. 其他物品：药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花等。四、操作步骤（一）玻璃器皿的洗涤和包装1．玻璃器皿的洗涤玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。将三角瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中．用毛刷刷洗，然后用自来水及蒸馏水冲净。移液管先用含有洗涤剂的水浸泡，再用自来水及蒸馏水冲洗。洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干后备用。2．灭菌前玻璃器皿的包装（1） 培养皿的包扎：培养皿由一盖一底组成一套，可用报纸将几套培养皿包成一包，或者将几套培养皿直接置于特制的铁皮圆筒内，加盖灭菌。包装后的培养皿须经灭菌之后才能使用。（2）
图8-1 移液管的包扎移液管的包扎：在移液管的上端塞入一小段棉花(勿用脱脂棉)，它的作用是避免外界及口中杂菌进入管内，并防止菌液等吸入口中。塞入此小段棉花应距管口约0.5cm左右，棉花自身长度约1~1.5cm。塞棉花时．可用一外围拉直的曲别针、将少许棉花塞入管口内。棉花要塞得松紧适宜，吹时以能通气而又不使棉花滑下为准。先将报纸裁成宽约5cm左右的长纸条，然后将已塞好棉花的移液管尖端放在长条报纸的一端，约成45℃角，折叠纸条包住尖睁埋端，用左手握住移液管身，有手将移液管压紧．在桌面上向前搓转，以螺旋式包扎起来。上端剩余纸条，折叠打结，准备灭菌。（二）液体及固体培养基的配制过程1．液体培养基配制1) 称量：一般可用0.01g天平称量配制培养基所需的各种药品，先按培养基配方计算出各成分的用量．然后进行准确称量。2) 溶解：将称好的药品置于一烧杯中，先加入少量水(根据实验需要可用自来水或蒸馏水)，用玻璃棒搅动，加热溶解。3) 定容：待全部药品溶解后，倒入一量筒中，加水至所需体积。如某种药品用量太少时，可预先配成较浓溶液，然后按比例吸取一定体积溶液，加入至培养基中。4) 调pH：一般用pH试纸测定培养基的pH。用剪刀剪出一小段pH试纸，然后用镊子夹取此段pH试纸，在培养基中蘸一下，观看其pH范围，如培养基偏酸或偏碱时，可用1mol/L NaoH或1mol/L HCl溶液进行调节。调节pH时，应逐滴加入NaOH或HCI溶液，防止局部过酸或过碱，破坏培养基中成分。边加边搅拌，并不时用pH试纸测试，直至达到所需pH为止。5) 过滤：用滤纸或多层纱布过滤培养基。一般无特殊要求时，此步可省去。2．固体培养基的配制 配制固体培养基时，应将已配好的液体培养基加热煮沸，再将称好的琼脂(1.5~2％)加入，并用玻棒不断搅拌，以免糊底烧焦。继续加热至琼脂全部融化，最后补足因蒸发而失去水分。（三）培养基的分装 根据不同需要，可将已配好培养基分装入试管或三角瓶内，分装时注意不要使培养基沾污管口或瓶悉毕蚂口，造成污染。如操作不小心，培养基沾污管口或瓶口时，可用镊子夹一小块脱脂棉，擦去管口或瓶口的培养基，并将脱脂棉弃去。1．试管的分装取一个玻璃漏斗，装在铁架上，漏斗下连一根橡皮管，橡皮管下端再与另一玻璃管相接，橡皮管的中部加一弹簧夹。分装时，用左手拿住空试管中部，并将漏斗下的玻璃管嘴插入试管内，以右手拇指及食指开放弹簧夹，中指及无名指夹佐玻璃管嘴，使培养基直接流入试管内。装入试管培养基的量视试管大小及需要而定，若所用试管大小为15×150 mm时，液体培养基可分装至试管高度1／4左有为宜；如分装固体或半固体培养基时，在琼脂完全融化后，应趁热分装于试管中。用于制作斜面的固体培养基的分装量为管高1／5(约3—4mI)，半固体培养基分装量为管高的1／3为宜。2．三角瓶的分装图8-2培养基的分装 用于振荡培养微生物时，可在250 m1三角瓶中加入50 m1的液体培养基；若用于制作平板培养基用时，可在250 m1三角瓶中加入150ml培养基，然后再加入3g琼脂粉(按2％计算)，灭菌时瓶中琼脂粉同时被融化。（四）棉塞的制作及试管、三角瓶的包扎 为了培养好气性微生物，需提供优良通气条件，同时为防止杂菌污染，则必须对通入试管或三角瓶内空气预先进行过滤除菌。通常方法是在试管及三角瓶口加上棉花塞等。1．试管棉塞的制作制棉塞时，应选用大小、厚薄适中的普通棉花一块，铺展于左手拇指和食指扣成的团孔上，用右手食指将棉花从中央压入团孔中制成棉塞．然后直接压入试管或三角瓶口。也可借用玻璃棒塞入，也可用折叠卷塞法制作棉塞。制作的棉塞应紧贴管壁，不留缝隙，以防外界微生物沿缝隙侵入，棉塞不宜过紧或过松，塞好后以手提棉塞，试管不下落为准。棉塞的2／3在试管内，1／3在试管外。目前也有采用硅胶塞代替棉塞直接盖在试管口上。将装好培养基并塞好棉塞或硅胶塞的试管捆成一捆，外面包上一层牛皮纸。用记号笔注明培养基名称及配制日期，灭菌待用。
图8-3 棉塞的制作
图8-4 正确与不正确的棉塞1.金属塞 2正确 3、4不正确 2．三角瓶棉塞制作通常在棉塞外包上一层纱布，再塞在瓶口上。有时为了进行液体振荡培养加大通气量，则可用8层纱布代替棉塞包在瓶口上，目前也有采用硅胶塞直接盖在瓶口上。在装好培养基并塞好棉塞或包扎八层纱布或盖好硅胶塞的三角瓶口上，再包上一层牛皮纸并用线绳捆好，灭菌待用。（五）培养基的灭菌培养基经分装包扎后，应立即按配制方法规定的灭菌条件进行进行高压蒸汽灭菌。（六）斜面和平板的制作1．斜面的制作将已灭菌装有琼脂培养基的试管，趁热置于木棒或玻棒上，使成适当斜度，凝固后即成斜面。斜面长度不超过试管长度l／2为宜。如制作半团体或固体深层培养基时，灭菌后则应垂直放置至凝固。2．平板的制作将装在三角瓶或试管中已灭菌的琼脂培养基融化后，待冷至50℃左右倾入无菌培养皿中。温度过高时，皿盖上的冷凝水太多；温度低于50℃，培养基易于凝固而无法制作平板。平板的制作应在火旁进行，左手拿培养皿，右手拿三角瓶的底部或试管，左手同时用小指和手掌将棉塞打开，灼烧瓶口，用左手大拇指将培养皿盖打开一缝，至瓶口正好伸入，倾入10~15mL培养基，迅速盖好皿盖，置于桌上，轻轻旋转平皿，使培养基均匀分布于整个平皿中，冷凝后即成平板。（七）培养基的灭菌检查灭菌后的培养基，一般需进行无菌检查。最好取出1~2管(瓶)，置于37℃温箱中培养1~2天，确定无菌后方可使用。（八）无菌水的制备在每个250mL的三角瓶内装100mL的蒸馏水并塞上棉塞或硅胶塞。在每支试管内装4.5mL蒸馏水，塞上棉塞或硅胶塞。再在棉塞上包上一张牛皮纸，高压蒸汽灭菌。0.1MPa灭菌20~30min。五、实验内容1. 根据要求清洗各种玻璃器皿，并进行包扎。2. 根据要求配制各种培养基。3. 用电热鼓风干燥箱对玻璃器皿进行干热灭菌。4. 用高压蒸汽灭菌锅对所配各培养基灭菌。六、实验报告1. 简述移液管和培养皿的包扎注意事项。2. 简述配制培养基的基本步骤及注意事项。3. 为什么微生物实验室所用的移液管口或滴管口的上端均需塞入一小段棉花，再用报纸包起来，经高压蒸汽灭菌后才能使用?4. 为什么微生物实验室所用的三角瓶口或试管口都要塞上棉塞（硅胶塞）才能使用？5. 配制培养基时为什么要调节pH？6. 高压蒸汽灭菌为什么比干热灭菌要求温度低、时间短？ 附录 灭菌技术一、目的要求了解消毒和灭菌的原理，并掌握各种灭菌方法的操作步骤。二、实验材料1. 仪器或其他用具：上述包扎的培养皿、试管、移液管等，电热鼓风干燥箱，高压蒸汽灭菌锅，微孔滤膜过滤器，0.22μm滤膜，注射器，镊子，玻璃涂棒。2. 培养基：上述配制的培养基及生理盐水三、基本原理在微生物实验中，需要进行纯培养，不能有任何杂菌污染，因此必须对所用器材、培养基和工作场所进行灭菌和消毒。灭菌是指杀死一定环境中的所有微生物，包括微生物的营养体、芽孢和孢子。实验室常用的灭菌方法包括直接灼烧、恒温干燥箱灭菌、高压蒸汽灭菌、间歇灭菌、煮沸灭菌等方法。这些方法的基本原理是通过加热使微生物体内蛋白质凝固变性，从而达到灭菌的目的。四、操作步骤（一）干热灭菌法干热灭菌是在电热干燥箱内利用高温干燥空气（160℃~170℃）进行灭菌，它是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌目的。此法适用于玻璃器皿如移液管、试管和培养皿的灭菌。培养基、橡胶制品、塑料制品不能采用干热灭菌。细胞内的蛋白质凝固性与其本身的含水量有关，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大，则蛋白质凝固就越快，反之含水量越小，凝固越慢。因此，与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度高（160℃~170℃），时间长（1~2h）。但干热灭菌温度不能超过180℃，否则，包器皿的纸或棉塞就会烧焦，甚至引起燃烧。干热灭菌使用的是电热干燥箱（干燥箱）。具体操作步骤如下：1. 装入待灭菌物品：将包好的待灭菌物品放入电热干燥箱内，关好箱门。堆积时要留有空隙，物品不要摆放得太挤，以免妨碍空气流通，灭菌物品不要接触电热干燥箱内壁的铁板、温度探头，以防包装纸烤焦起火。2. 升温：接通电源，打开开关，适当打开电热干燥箱顶部的排气孔，旋动恒温调节器，使温度逐步上升。当温度升至100℃时，关闭排气孔。在升温过程中，如果红灯熄灭，绿灯亮，表示电热干燥箱内停止加温，此时如果还未达到所需的160℃~170℃，则需要转动温度调节器使红灯亮，如此反复调节，直至达到所需的温度。3. 恒温：当温度升到160℃~170℃时，借助恒温调节器的自动控制，保持此温度2h。干热灭菌过程中，严防恒温调节的自动控制失灵而造成安全事故。4. 降温：切断电源，自然降温。5. 开箱取物：待电热干燥箱内温度降到60℃以下后，才能打开箱门，取出灭菌物品。同时，应将温度调节旋钮调到零点，并打开排气孔。电热干燥箱内温度未降到60℃以前，切勿自行打开箱门，以免骤然降温导致玻璃器皿炸裂。（二）高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌是将物品放在密闭的高压蒸汽灭菌锅内，在一定的压力下保持15~30分钟进行灭菌。此法适用于培养基、无菌水、工作服等物品的灭菌，也可用于玻璃器皿的灭菌。将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅夹套间的水沸腾而产生蒸汽。待水蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中排尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌锅内的压力，从而使沸点增高，获得高于100℃的温度，导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。在相同的温度下，湿热灭菌的效果好于干热灭菌。有三点原因：在湿热灭菌中菌体吸收水分，蛋白质容易凝固变性，蛋白质随着含水量的增加，所需凝固温度降低；湿热灭菌中蒸汽的穿透力比干燥空气大；蒸汽在被灭菌物体表面凝结，释放出大量的汽化潜热，能迅速提高灭菌物体表面的温度，从而增加灭菌效力。实验室常用的灭菌锅有非自控手提式高压蒸汽灭菌锅和自控式灭菌锅，其结构和工作原理是相同的。本实验介绍的是非自控手提式高压蒸汽灭菌锅，自控式灭菌锅的使用可参考厂家说明书。具体操作步骤如下：1. 加水：首先将内层锅取出，再向外层锅内加入适量的水，使水面没过加热蛇管，与三角搁架相平为宜。切勿忘记检查水位，加水量过少，灭菌锅会发生烧干引起炸裂事故。2. 装料：放回内层锅，并装入待灭菌的物品。注意不要装得太挤，以免妨碍蒸汽流通而影响灭菌效果。装有培养基的容器放置时要防止液体溢出，三角瓶与试管口端均不要与桶壁接触，以免冷凝水淋湿包扎的纸而透入棉塞。3. 加盖：将盖上与排气孔相连的排气软管插入内层锅的排气槽内，摆正锅盖，对齐螺口，然后以对称方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气，并打开排气阀。4. 排气：打开电源加热灭菌锅，将水煮沸，使锅内的冷空气和水蒸汽一起从排气孔中排出。一般认为当排出的气流很强并有嘘声时，表明锅内的空气已排尽，沸腾后约需5分钟。5. 升压：冷空气完全排尽后，关闭排气阀，继续加热，锅内压力开始上升。6. 保压：当压力表指针达到所需压力时，控制电源，开始计时并维持压力至所需的时间。如本实验中采用0.1Mpa，121.5℃，20分钟灭菌。灭菌的主要因素是温度而不是压力，因此锅内的冷空气必须完全排尽后，才能关闭排气阀，维持所需压力。7. 降压：达到灭菌所需的时间后，切断电源，让灭菌锅温度自然下降，当压力表的压力降至“0”后，方可打开排气阀，排尽余下的蒸汽，旋松螺栓，打开锅盖，取出灭菌物品，倒掉锅内剩水。压力一定要降到“0”后，才能打开排气阀，开盖取物。否则就会因锅内压力突然下降，使容器内的培养基或试剂由于内外压力不平衡而冲出容器口，造成瓶口被污染，甚至灼伤操作者。8. 无菌检查：将已灭菌的培养基放入37℃恒温培养箱培养24h，检查无杂菌生长后，即可使用。 （三）过滤除菌有些物质，如抗生素、血清、维生素、糖溶液等采用加热灭菌法时，容易受热分解而被破坏，因而要采用过滤除菌法。过滤除菌是通过机械作用滤去液体或气体中细菌的方法，该方法最大的优点是不破坏溶液中各种物质的化学成分。过滤除菌法除实验室用于溶液、试剂的除菌外，在微生物工作中使用的净化工作台也是根据过滤除菌的原理设计的，可根据不同的需要来选用不同的滤器和滤板材料。应用最广泛的过滤器种类有：1. 微孔滤膜过滤器：是一种新型过滤器，它由上下二个分别具有出口和入口连接装置的塑料盒组成，出口处可连接针头，入口处可连接针筒，使用时将滤膜装入两塑料盒之间，旋紧盒盖，当溶液从针筒注入滤器时，各种微生物被阻留在微孔滤膜上面，而液体和小分子物质通过滤膜，从而达到除菌的目的。其滤膜是由硝酸纤维素、醋酸纤维素等制成的薄膜，有孔径大小不同的多种规格（如0.1μm、0.22μm、0.3μm、0.45μm等），实验室中用于除菌的微孔滤膜孔径一般为0.22μm。根据待除菌溶液量的多少，可选用不同大小的滤器。该滤器的优点是吸附性小，即溶液中的物质损耗少，过滤速度快，每张滤膜只使用1次，不用清洗。2. 蔡氏（Seitz）过滤器：是一种金属制成的过滤漏斗，其过滤部分是一种用石棉纤维和其他填充物压制成的片状结构。溶液中的细菌通过石棉纤维的吸附和过滤而被去除，但对溶液中其他物质的吸附性也大，每张纤维板只能使用1次。3. 玻璃过滤器：是一种玻璃制成的过滤漏斗，其过滤部分是由细玻璃粉烧结成的板状构造。玻璃滤器的规格很多，5号（孔径2~5μm）和6号（孔径<2μm）适用于过滤细菌，其优点是吸附量少，但每次使用后要洗净再用。本实验采用微孔滤膜过滤器进行过滤除菌，具体操作步骤如下：1. 组装、灭菌：将0.22�0�8m孔径的滤膜装入清洗干净的塑料滤器中，旋紧压平，包装灭菌后待用（0.1Mpa，121.5℃，灭菌20分钟）。2. 连接：将灭菌滤器的入口在无菌条件下，以无菌操作方式连接于装有待滤溶液的注射器上，将针头与出口处连接并插入带橡皮塞的无菌试管中。3. 压滤：将注射器中的待滤溶液加压缓缓挤入过滤到无菌试管中，滤毕，将针头拔出。压滤时用力要适当，不可太猛太快，以免细菌被挤压通过滤膜。4. 无菌检查：无菌操作吸取除菌滤液0.1mL于肉汤蛋白胨平板上，均匀涂布，置37℃恒温培养箱培养24小时，检查是否有杂菌生长。5. 清洗：弃去塑料滤器上的微孔滤膜，将塑料滤器清洗干净，并换上一张新的微孔滤膜，组装包扎，再经灭菌后使用。整个过程应严格按照无菌操作，以防污染，过滤时应避免各连接处出现渗透现象。 来自百度，本人整理，没法上图！
请问,如何找到《计划免疫技术管理规程》卫疾控发[1998]第50号的附录部分有关脊髓灰质炎方面的信息,谢谢!
一章 疫苗及其使用管理
1 疫苗及其免疫程序
1．2 免疫程序 我国儿童计划免疫现行的免疫程序为： 儿童计划免疫的免疫程序
－－－－－－－ 年（月）龄 接种疫苗
－－－－－ 出生时 卡介苗 乙肝疫苗①
1月龄 乙肝疫苗②
2月龄 脊灰疫苗①
3月龄 脊灰疫苗② 百白破①
4月龄 脊灰疫苗③ 百白破②
5月龄 百白破③
6月龄 乙肝疫苗③
8月龄 麻疹疫苗
1．5～2岁 百白破
4岁 脊灰疫苗
7岁 麻疹疫苗 白破二联
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－ 注：○内数字表示接种针次
2 疫苗需用计划的制订
2．1 疫苗需用计划制订的依据
2．1．1 现行的儿童免疫程序。
2．1．2 本地区的人口资料 包括总人口数，城市、城镇、农村的人口数，计划免疫服务人群各年龄组人口数，出生率、死亡率、自然增长率，以及外县（区、市、旗，下同）流入的适龄儿童数等。
2．1．3 本地区计划免疫针对疾病的发病率、人群免疫水平和免疫策略。
2．1．4 免疫接种的服务形式及计划免疫工作的开展情况。
2．1．5 疫苗运输、贮存的形式和能力。
2．1．6 疫苗消耗系数 疫苗消耗系数是指各种疫苗每接种1人次所需消耗的疫苗人份数，是根据接种的服务形式、冷链运转周期、人口密度、疫苗包装大小等而确定的。一般而言，接种周期短、伏核疫苗包装量大、人口密度小，疫苗消耗系数大，反之则小。计划免疫所用疫苗的消耗系数可参照下列标准或省级卫生防疫机构制定的缺亩掘标准执行。
BCG：2．0～3．0；OPV；1．1～1．3；DPT、DT；1．5～2．0；MV：1．5～2．0。
2．1．7 传染病防制规划中的特殊免疫计划。
2．2 疫苗计划需用量的计算
2．2．1 常规免疫所用疫苗计划需用量的计算
常耐哗规免疫所用疫苗计划需用量＝基础免疫需用量＋加强免疫需用量 其中：基础免疫疫苗需用量＝总人口数×出生率×每人份疫苗接种剂量
×免疫次数×疫苗消耗系数
加强免疫疫苗需用量＝需加强免疫年龄组人口数之和×每人份疫苗
接种剂量×免疫次数×疫苗消耗系数
加强免疫包括免疫程序中的百白破、脊灰疫苗、麻疹疫苗、白破二联。
如无各年龄组人口数时，可用下列公式粗略计算：
加强免疫疫苗需用量＝总人口数×出生率×需加强免疫的年龄组数
×每人份疫苗接种剂量×免疫次数×疫苗消耗系
数；
疫苗消耗系数＝疫苗分配数（或领用数）÷（基础免疫每人份疫苗接种剂量
×基础免疫人数＋加强免疫每人份疫苗接种剂量×加强免
疫人数）。
2．2．2 特殊免疫所用疫苗计划需用量的计算 例：OPV强化免疫需用量＝需强化免疫年龄组人口数之和×每人份疫苗接
种剂量×免疫次数×疫苗消耗系数
其他特殊免疫（如应急免疫或成人免疫）所用疫苗计划需用量的计算，可根据当地计划免疫针对疾病的发病、免疫策略等，并参照上述有关公式进行计算。
2．3 疫苗计划制订的程序及上报时间
2．3．1 城市医院保健（防保）科（组）、农村乡（镇）卫生院防保站（组）为疫苗计划编制的基层单位，每年3月中旬前向县级（区、市、旗，下同）卫生防疫机构上报下一年度的疫苗需用计划。
2．3．2 县级卫生防疫机构每年3月底前向地区级（市、州、盟，下同）卫生防疫机构上报下一年度的疫苗需用计划。
2．3．3 地区级卫生防疫机构每年4月中旬前向省级（自治区、直辖市，下同）卫生防疫机构上报下一年度的疫苗需用计划。
2．3．4 县、地区、县级卫生防疫机构要对下级卫生防疫机构上报的疫苗需用计划进行审核、平衡。
2．3．5 省级卫生防疫机构汇总地区级卫生防疫机构上报的下一年度疫苗需用计划，经省级卫生行政部门核准后，于4月底前上报卫生部有关司、局，并与生产单位签订供货合同。
3 疫苗的管理
3．1 根据《中华人民共和国药品管理法》、《中华人民共和国传染病防治法》及其实施办法和卫生部下发的《生物制品管理规定》、《预防用生物制品生产供应管理办法》等有关法律、法规及规章的规定，各级卫生行政部门对预防用生物制品实施统一监督管理。省级卫生防疫机构具体负责疫苗的统一订购，并逐级供应各级卫生防疫机构和基层接种单位。未经卫生部批准，其他任何单位和个人不得经营预防用生物制品。
3．2 疫苗贮存数量
3．2．1 省级、地区级和县级卫生防疫机构疫苗贮存数量，应本着既要保证接种工作的实际需要，又要避免疫苗失效、浪费的原则，根据当地的免疫策略、年度工作计划、接种服务形式、冷链贮存条件以及应急免疫需要等情况而定。
3．2．2 具备冷藏条件的乡镇（街道）卫生院等单位疫苗贮存量一般不得超过1个月的使用量。
3．3 各级卫生防疫机构和城乡卫生防保单位以及基层接种点要有专人负责疫苗的管理，建立健全疫苗领发、保管制度，设立疫苗专用账本，做到账苗相符。
3．4 疫苗要在规定的温度条件下贮存、运输BCG、DPT、DT和HBV在2℃～8℃贮存和运输。OPV和MV需在－20℃～8℃的条件下运输，贮存期若在3个月以上，要于－20℃条件下贮存，贮存期在3个月以内，则在－20℃或2℃～8℃条件下运输。
3．5 疫苗要按品名、批号分别存放，并按照效期长短、进库先后，有计划地分发。
3．6 每次领发的疫苗数量要根据需用量和贮存能力安排。
3．7 下发给基层接种点的疫苗要以支、丸为单位，以减少疫苗的浪费。
第二章 预防接种证、卡（簿）的管理
1 预防接种证、卡（簿）的建立
1．1 根据《中华人民共和国传染病防治法》及其实施办法的规定，国家对儿童实行预防接种证制度。每名适龄儿童都必须按规定建立预防接种证，并实行凭证接种和办理入托、入园、入学手续的制度。
1．2 7岁及7岁以下儿童（包括流动人口儿童和计划外生育儿童）应由居住地的基层接种点负责建立预防接种证、卡（簿）。
1．3 儿童出生后，城市在1个月内、农村在2个月内，由户口所在地的基层接种点建立预防接种证、卡（簿）。
1．4 7岁及7岁以下儿童寄居本地时间在3个月或3个月以上，应由寄居地的基层接种点建立预防接种证、卡（簿）。
1．5 积极推广儿童计划免疫保偿制，规范保偿制的管理办法。对未入保儿童应与入保儿童一样对待，严格执行预防接种证、卡（簿）的管理，并实施接种。
1．6 预防接种证、卡（簿）的制作和管理由省级卫生行政部门统一规定。
2 预防接种证、卡（簿）的使用与管理
2．1 预防接种证、卡（簿）要由实施接种的医生用钢笔填写，书写要工整，文字要规范，各项内容填写要准确、齐全，时间（日期）栏、项填写均要以公历为准。
2．2 预防接种证由儿童家长或其监护人保管，遗失要及时补发。预防接种卡（簿）城市由接种点保管，农村由乡（镇）卫生院保管。
2．3 儿童迁移时，由寄居地的接种点或预防接种卡（簿）保管单位将预防接种卡或接种证明交给儿童家长或其监护人，并将接种资料留据存查；迁入地的接种点要主动向儿童家长或其监护人索取预防接种证、卡或接种证明；无预防接种证、卡或接种证明要及时补建证、卡。
2．4 接种单位至少每半年对所辖区域进行一次预防接种证、卡（簿）的核查和整理，及时补卡、剔卡和消卡，剔出的卡片由接种点另行妥善保管。
第三章 冷链系统及其管理
1 冷链系统的一般管理
1．1 各级冷链设备应按规定的装备标准进行配置，并做到专物专用，不得挪作它用。
1．2 冷链设备必须建档建账，建立健全领发手续和登记制度，做到账、物相符。
1．3 冷链设备运输时，要捆扎牢固，轻搬轻放，摆放整齐，避免剧烈颠簸。电冰箱搬运时倾斜不得超过45度。
1．4 冷链设备要有专室或固定房间存放，并有专人负责管理或维修。
1．5 各级冷链设备的管理人员必须经过培训，建立必要的管理和考核制度。
1．6 设备验收 冷链设备到货后应及时组织专业技术人员验收。
1．6．1 清箱点数 根据到货通知单提供的品名、型号、件数清点。
1．6．2 外观检查 开箱检查外形有无挤压、碰撞痕迹及变形，油漆有无剥脱，螺丝有无脱落等。
1．6．3 清点附件 有无说明书及产品合格证，根据说明书核对清点设备所带附件及工具。
1．6．4 试机 熟悉说明书，根据说明书提供的设备技术性能标准，对设备的性能进行检验。
1．6．5 冷藏车、冷库、电冰箱、冷藏箱应逐台验收，省级卫生防疫机构对冷藏箱（包）应抽检10％，县级卫生防疫机构全部开箱检验。
1．6．6 填写验收报告 内容包括品名、数量、型号、产地，收货时间，验收情况。如有问题应有详细文字记录，并附有照片或录像。
1．6．7 进口设备应在到达我国口岸验收期内将验收情况报至卫生部。国产设备应在保修期或合同规定的时间内验收，并及时报告有关部门。
1．6．8 进口设备的使用说明书应翻译成中文，印发至各级使用单位。
1．7 冷藏车、冷库和电冰箱在使用时，应定期对其运转情况及其温度进行监测，并做好记录，以保证疫苗在运输和贮存过程中的质量。
2 冷藏车
2．1 冷藏车是运送疫苗的专用车辆，应办理特种车辆证。
2．2 冷藏车要经常保持机械和冷藏系统的良好状态，每次运输任务完成后要及时做好清洗打扫工作，保持车内外整洁。
2．3 疫苗装车应按下重上轻、左右平衡的原则，疫苗摆放要留有冷气循环的通道，并随车携带外接电源线，锁好车厢门。
2．4 根据疫苗的温度要求调整车厢内的温度。
2．5 冷藏车运输途中要中速行驶，避免剧烈颠簸。
2．6 使用外接电源时应核对电压，电压不符不能使用。
3 冷库
3．1 制冷机组应专线供电，并安装电压、电流指示仪表。
3．2 冷库内存放的疫苗应按品名、失效期（或批号）分类分堆码放，每天记录冷库内的温度及机器运转情况。
3．3 省级及有条件的地区级卫生防疫机构的冷库应配有备用制冷机组和发电机组。
3．4 冷库应备有维修工具、消防器材和易损易坏零配件。
4 电冰箱（普通电冰箱、低温电冰箱、冰排速冻器）
4．1 电冰箱的安装
4．1．1 电冰箱应安装在干燥通风的房间内，避免阳光直射，远离热源（火炉、暖气、干燥箱、恒温箱等）。
4．1．2 电冰箱的上、后部要留有30cm、10cm以上的空间，底部要配有20cm高的搁架。
4．1．3 电冰箱的电源线容量应在5安培以上，每台电冰箱要安装1个专用插座，不能与其他电冰箱或电器设备共用插座。
4．1．4 每台电冰箱的电源插座要配有2安培保险丝，大于和小于2安培的保险丝都不能使用。
4．1．5 电压不稳（高于220伏电压的5％或低于15％）的地区应配有稳压装置。
4．1．6 电冰箱要安装电阻小于5欧姆的地线，地线不能接在自来水管或煤气管上。
4．1．7 电冰箱要摆放平稳，避免震动。
4．1．8 一个房间安装数台电冰箱时，应有空调装置或排气风扇。
4．2 电冰箱的调试
4．2．1 接通电源，检查压缩机运转情况，运转不正常应停机断电查找原因。
4．2．2 开机后，测试电冰箱是否制冷，记录达到设计温度所需时间。
4．2．3 测试并记录温度控制旋钮各档次所指示的温度。
4．2．4 测试记录压缩机启动的间隔时间和每次的运转情况。
4．2．5 调节至所需温度，但不可一次调得过低，每次调节后需待温控自停自开多次（时间约2小时），箱内温度方可稳定。若达不到所需温度，应再作调整。
4．2．6 安装、调试结果记入电冰箱技术档案。
4．3 电冰箱的使用
4．3．1 贮存疫苗
（1）地区、县级卫生防疫机构低温电冰箱（冰排速冻器）贮存OPV、MV，普通电冰箱贮存BCG、DPT、HBV、DT等。
（2）乡级使用的疫苗，包括OPV、MV，均应贮存在冷藏室内，若已配备了低温电冰箱（冰排速冻器），则OPV、MV可贮存在低温电冰箱（冰排速冻器）内。
（3）电冰箱内贮存的疫苗要摆放整齐，疫苗与箱壁、疫苗与疫苗之间应留有1～2cm的空隙。疫苗要按品名和失效期分类摆放。
（4）冰箱门因经常开启温度变化较大，冰箱门内搁架不宜放置疫苗。
（5）高温季节和停电时尽量减少开启冰箱门的次数。
（6）在贮存疫苗的电冰箱中部放一支温度计，每天上班后、下班前记录温度。停机时要记录原因和持续时间。
4．3．2 冻制冰排
（1）冰排内注入清洁水，注入量为冰排容积的90％。
（2）注水后冰排直立放在低温电冰箱（冰排速冻器）的冻结部分，冻制时间不少于24小时，每次冻制的数量不超过低温电冰箱（冰排速冻器）的设计能力。
（3）在冻制冰排时，冰排与低温电冰箱（冰排速冻器）箱壁之间留有3～5cm的间隙。
（4）已冻结的冰排由低温电冰箱（冰排速冻器）的冻结部分移至贮存部分，再把其他已注入水的冰排放在低温电冰箱（冰排速冻器）的冻结部分。
（5）冻制冰排时可不盖瓶盖，待使用前盖好旋紧。
4．3．3 电冰箱温度控制旋钮应调至中档，特殊情况需将电冰箱内温度调至最低时，压缩机持续工作时间不能超过3小时。
4．4 电冰箱的保养与维修
4．4．1 经常保持电冰箱的清洁，做到无灰尘、无污迹。
4．4．2 电冰箱蒸发器结霜厚度超过4毫米时要及时化霜和除霜。
4．4．3 电冰箱长期停止使用时，应将箱内外擦干擦净，每周开机2小时。
4．4．4 每季对电冰箱进行一次全面保养。切断电源，检查电冰箱铰链、门封条、螺丝是否松动变形，彻底清除电冰箱内外暴露部分的灰尘和污物。
4．4．5 每年对电冰箱的性能进行一次全面检验和测试。
4．4．6 发现电冰箱出现异常或故障应及时报告，由专业人员或修理单位进行检查和修理，非专业技术人员不得随便拆卸。
5 冷藏箱
5．1 使用
5．1．1 运送和短期贮存疫苗
（1）将冻结的冰排整齐地摆放在箱内四边和底部，中部摆放疫苗，上面覆盖冰排。
（2）箱内冰排数量可根据气温、运输时间调整，疫苗安瓿不能直接与冰排接触，要采取措施避免疫苗破碎、冻结和潮解。
5．1．2 运送冰排 将冻结的冰排整齐地摆放在冷藏箱内。
5．1．3 冷藏箱要锁紧，装车时摆放平稳，运输途中要避免阳光直射、碰撞和剧烈颠簸。
5．2 保养
5．2．1 每次使用后及时收回，擦净水迹和污迹，保持箱内外干燥和清洁。
5．2．2 每次使用后检查锁扣、拉手、铰链和橡皮垫等易损部件，如有损坏及时修理和更换。
5．2．3 经常给锁扣和铰链注润滑油。
6 冷藏包
6．1 使用
6．1．1 冰排冻制后可能有轻微变形，装包时应将变形小的一面与包壁接触。
6．1．2 冷藏包的内部底层应垫上能减震和吸水的纱布或纸。
6．1．3 采取相应措施，防止疫苗安瓿碰破及液体疫苗和稀释液冻结，防止OPV潮解。
6．1．4 装好疫苗后要立即盖上冷藏包盖，扣好锁扣或拉链。
6．1．5 自行车运输冷藏包时要捆扎牢固，注意避免链条轧断包带。
6．1．6 冷藏包内放置冰排的数量，应根据气温、完成接种的时间要求进行调整。
6．1．7 冷藏包的使用单位要固定，每次领交时要有检查和记录。
6．1．8 冷藏包要专用，不能放与疫苗无关的物品（如食物、粪便标本等）。
6．2 保养
6．2．1 冷藏包要摆放在特制的木架上，存放冷藏包的房间要通风干燥。
6．2．2 冷藏包沾有污染要及时用软湿布擦拭，不能用水冲洗。
6．2．3 冷藏包内潮湿要打开包盖，放在通风处吹干，避免阳光曝晒。
6．2．4 冷藏包损坏要及时整理和更换。
7 冰排
7．1 每次冷链运转后，应将冰排从冷藏箱（包）内及时取出，倒出冰排内的水，擦去污迹。
7．2 冰排应与冷藏箱（包）分开存放。
第四章 接种的组织与实施
1 接种的服务形式
1．1 城市、城镇应开设接种门诊，实行按日、周、旬接种。
1．2 农村地区实行月（或双月）接种；有条件的农村地区，可推广以乡为单位定时定点接种门诊形式，实行按周、旬接种。
1．3 交通不便的山区、海岛、少数民族边远地区和牧区等每年至少要提供6次免疫服务。
1．4 实行按日、周、旬、月接种的地区要固定接种日期和接种点。接种日期要选在大多数群众方便的时间，接种点应根据人口密度、接种对象数量和交通情况设置。
1．5 乡（镇、街道、下同）、村（居委会，下同）基层卫生单位要成立接种组或专人具体负责接种工作。接种组成员要相对稳定，职责明确。
1．6 对流动人口儿童、计划外生育儿童和各种原因未能如约接种的儿童，应采取各种方式给予补种。
2 计划免疫的宣传与培训
2．1 利用每年4月25日“全国儿童预防接种日”及其他有利时机，开展健康教育活动，普及计划免疫科学知识。
2．2 凡参加接种的人员都必须经过计划免疫专业培训，能正确掌握接种对象，疫苗性质，接种部位、剂量、方法和禁忌证、接种反应判断、处理方法，预防接种安全注射的基本知识和操作技能。实行持证上岗的制度。
3 接种前的准备工作
3．1 确定接种对象
3．1．1 根据卫生部规定的儿童免疫程序，确定应接种对象，及时建立预防接种证、卡（簿）。
3．1．2 准备登记统计表册；清理接种卡（簿），根据接种记录，核实接种对象；选出接种对象卡片（或抄写名单）。
3．1．3 主动搜索并发现流动人口和计划外生育儿童中的接种对象。
3．2 通知儿童家长或其监护人。
3．2．1 采取各种方式，如通知单、广播、口头通知等，通知儿童家长或其监护人。
3．2．2 通知应包括接种对象的姓名、接种日期及地点、疫苗名称、禁忌证和注意事项等内容。
3．3 分发和领取疫苗。
3．3．1 根据本次各种疫苗的应接种人数计算领取疫苗数量。
3．3．2 准备冷藏包（箱）。
3．3．3 办理领发疫苗的手续，做好疫苗的领发登记，包括领发单位、疫苗的名称、数量、生产单位、批号、失效期、领发时间、经手人签字等。
3．3．4 将疫苗放入已装好冰排的冷藏包（箱）内，分发至各基层接种点。
3．3．5 OPV和MV放在冷藏包（箱）的底层；BCG放在中层，并有醒目标记；DPT、DT、HBV放在上层，不要紧靠冰排防止冻结。
3．3．6 OPV应装在小瓶或塑料袋内，BCG、DPT、MV、DT、HBV和稀释液要用纱布包好，冷藏包的空隙也要用纱布或纸张填充，以防止疫苗震碰破损。
3．4 准备和消毒接种器材
3．4．1 按应接种对象人次数的1．2倍准备接种器材，包括1ml、2ml玻璃注射器和4．5号、5号、5．5号、6号针头及卡介苗专用注射器和针头。有条件的可使用有批准文号的合格的一次性无菌塑料注射器进行接种。
3．4．2 玻璃注射器和针头用清洁水清洗干净，挑出并废弃破损的注射器和弯曲、带钩、不锐利的针头。清洗时应抽出注射器的针芯，洗好后针筒针芯对号，包上脱脂纱布进行消毒。针头成排插在纱布的夹层中待消毒。
3．4．3 压力蒸汽灭菌 使用手提式压力蒸汽灭菌器时，蒸汽压力要达到1．05～1．40kg／平方厘米（15～20磅或121．3～126℃），并持续25分钟（压力表应校正、测试）；使用便携式压力蒸汽灭菌器时，要在确保限压阀间歇排汽后持续15分钟（海拔2500米以上的地区需持续30分钟）。
3．4．4 煮沸消毒 是在无压力蒸汽灭菌器的情况下的消毒方法，要把接种器材完全浸没在水中，水面高出消毒物2cm以上，持续煮沸30分钟。
3．4．5 经压力蒸汽灭菌后的接种器材保存期为1周，经煮沸消毒后的接种器材当日使用。超过保存期或打开后需重新消毒方能使用。
3．4．6 使用一次性无菌塑料注射器时，使用前要检查包装是否完好并在有效期内使用。
3．4．7 准备和消毒喂服OPV糖丸疫苗的小口杯、药匙。
3．5 准备药品、器械 75％乙醇、95％乙醇、镊子、棉球杯、消毒棉球或棉签、酒精灯、小型煮沸消毒器、治疗盘、体温表（肛表或口表）、甘油、听诊器、注射器、压舌板、血压计、针灸针、1∶1000肾上腺素针剂等。
3．6 分发器材 将药品和已消毒好的注射器材及器械装入接种箱（包），分发至各个基层接种点，并做好领用登记。
3．7 接种场所的设置 接种场所的选择要考虑交通方便，居民集中，且要相对固定；室内应宽敞清洁、光线明亮、通风保暖，并准备好接种工作台、坐凳以及儿童和家长休息、等候的坐凳；室外要设有醒目的标志，便于群众识别。接种场所要布置儿童保健和计划免疫内容的健康教育和宣传资料。
4 接种时的工作
4．1 现场组织
4．1．1 工作人员要做好接种现场的宣传和组织，特别在进行集体性接种时，应根据接种对象的不同特点，耐心、细致地做好各方面的组织准备，确保接种工作有秩序地进行。
4．1．2 同时接种几种疫苗时，应将不同疫苗的接种对象按疫苗分组进行接种，也可以在接种场所设置不同疫苗的接种标记进行接种，避免错种、重种和漏种。
4．2 核实接种对象与问诊
4．2．1 接种前进一步核实接种对象和接种证 回收接种通知单，检查儿童预防接种证、卡，核对儿童姓名、性别，出生年、月、日及接种记录，确认是否为本次接种对象，接种何种疫苗。发现原始记录中儿童姓名，出生年、月、日有误应及时更正。对不属于本次接种的对象，要向儿童家长或其监护人做好说服解释工作。
4．2．2 向儿童家长或其监护人详细询问儿童近期的健康状况、既往疾病史、过敏史和接种疫苗的反应史，必要时测量体温和进行体检，凡有禁忌证的对象不予接种或暂缓接种，并在预防接种证、卡上做好记录。
4．3 疫苗使用
4．3．1 检查疫苗，接种疫苗前必须严格核对要接种的疫苗品种，检查外观质量。凡过期、变色、污染、发霉、有摇不散的凝块或异物，无标签或标签不清，安瓿有裂纹或受过冻结的液体疫苗，一律不得使用。
4．3．2 疫苗应避免受到阳光直接照射，使用前方可从冷藏容器内取出。
4．3．3 尽量减少开启冷藏容器的次数，开后应及时关严。
4．3．4 吸取疫苗
（1）吸取疫苗前应排净注射器和针头内的水分。
（2）将安瓿尖端疫苗弹至体部。
（3）用砂轮割锯安瓿颈部，75％乙醇棉球消毒安瓿颈部后，再用消毒干棉球包住颈部掰开。
（4）将注射器针头斜面向下放入安瓿的液面下，吸取疫苗。
（5）吸取疫苗后，将注射器的针头向上，排出注射器内的气泡，直至针头上有一小滴疫苗出现为止。
（6）临时煮沸消毒的注射器材，一定要在冷却后再吸取疫苗。
（7）使用冻干疫苗时，用注射器抽取稀释液，沿安瓿内壁缓慢注入，轻轻摇荡，使疫苗充分溶解，避免出现泡沫。
（8）含有吸附剂的疫苗使用前，必须充分摇匀。
4．3．5 安瓿启开后，未吸取用完的疫苗应盖上消毒干棉球；活疫苗超过半小时、灭活疫苗超过1小时未用完，应将疫苗废弃。
4．4 接种操作 后面还有去这网页也看